FDA關(guān)于ANDA強(qiáng)制降解試驗(yàn)的觀點(diǎn)
一、強(qiáng)制降解試驗(yàn)簡(jiǎn)介
二、仿制藥強(qiáng)制降解試驗(yàn)研究存在的問(wèn)題
三、如何進(jìn)行強(qiáng)制降解試驗(yàn) 1、降解條件
典型的強(qiáng)制降解主要包括四種機(jī)制：高溫、水解、氧化和光降解。
選擇適當(dāng)?shù)钠茐臈l件，如酸堿和氧化劑的濃度、破壞溫度、適宜的破壞時(shí)間，以實(shí)現(xiàn)樣品最佳降解程度。
樣品破壞過(guò)度會(huì)產(chǎn)生在藥品穩(wěn)定性研究過(guò)程中和正常破壞條件下均不會(huì)產(chǎn)生的二次降解產(chǎn)物，這并不是降解試驗(yàn)的目的。
因此，控制樣品降解達(dá)到預(yù)期水平是十分必要的。為了實(shí)現(xiàn)有目的的降解，應(yīng)制定適宜的降解研究方案。同時(shí)為加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)的放置條件提供依據(jù)。
通常認(rèn)為樣品降解量應(yīng)在5~20%之間。對(duì)于含量限度為標(biāo)示量的90%~110%的小分子藥物，即使在文獻(xiàn)中有更廣泛的推薦范圍作為參考（例如，10~30%），通常允許10%的降解量。降解試驗(yàn)破壞條件越劇烈，則越容易產(chǎn)生二級(jí)降解產(chǎn)物。
1.1光穩(wěn)定性
光穩(wěn)定性試驗(yàn)是強(qiáng)制降解試驗(yàn)的重要組成部分，對(duì)光敏感藥物尤為重要。ICH Q1B指導(dǎo)原則提出了新原料藥和制劑的光穩(wěn)定性試驗(yàn)條件。
原料藥、固體/液體制劑,應(yīng)暴露在總照度不低于1.2×106 Lux ?hr,近紫外能量不低于200w?hr/ m2的條件下,相同樣品應(yīng)同時(shí)暴露在日光燈和近紫外燈下。可控制合適的溫度以減少局部溫度變化效應(yīng)。
光破壞樣品要檢查樣品是否有物理性質(zhì)(如外觀、溶液的顏色或澄清度)、含量和降解產(chǎn)物的變化。
Q1B中列出的決策樹(shù)可以用來(lái)確定藥物的光穩(wěn)定性試驗(yàn)條件。產(chǎn)品標(biāo)簽應(yīng)列出產(chǎn)品適宜儲(chǔ)存條件,要注意仿制藥標(biāo)簽應(yīng)和參考上市藥物標(biāo)簽以及美國(guó)藥典(USP)相關(guān)建議(如適用)保持一致。
1.2熱穩(wěn)定性
熱破壞試驗(yàn)條件（例如：干熱破壞和濕熱破 ）應(yīng)比ICH Q1A中推薦的加速試驗(yàn)條件劇烈。
固體原料藥和制劑應(yīng)同時(shí)暴露于干熱和濕熱條件下，而液體制劑可以暴露于干熱條件下。
建議破壞溫度應(yīng)高于加速試驗(yàn)溫度的10℃，相對(duì)濕度為75%或者更高。破壞試驗(yàn)也可以在更高溫度條件下進(jìn)行短時(shí)間破壞。對(duì)破壞樣品進(jìn)行多個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)，能夠充分提供降解速率、一級(jí)與二級(jí)降解產(chǎn)物的信息。
即使藥物較穩(wěn)定，產(chǎn)生較少降解產(chǎn)物或無(wú)降解產(chǎn)物產(chǎn)生,也應(yīng)確保破壞強(qiáng)度高于在加速條件下（40℃）放置6個(gè)月的破壞強(qiáng)度。
1.3酸堿水解
原料藥與制劑應(yīng)在常溫或更高溫度條件下，以溶液狀態(tài)進(jìn)行酸堿水解破壞試驗(yàn)，酸堿種類和濃度的選擇取決于藥物本身的特點(diǎn)。
其中一種酸堿破壞試驗(yàn)方案為樣品于室溫條件下放置，在不同pH條件下破壞兩周，并且破壞程度建議應(yīng)不高于15%。
酸降解一般采用0.1mol/L-1.0mol/ L的鹽酸或硫酸，堿降解采用0.1mol/L-1.0mol/ L的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液。
對(duì)于脂溶性藥物，可選擇惰性溶劑溶解藥物，在選擇助溶劑時(shí)，應(yīng)考慮藥物分子中存在的官能團(tuán)不與助溶劑發(fā)生反應(yīng)。
了解化合物的相關(guān)性質(zhì)對(duì)于選擇破壞條件是有用的，例如，一個(gè)化合物含有酯基，則它對(duì)堿是不穩(wěn)定的，則可選擇較低濃度的堿進(jìn)行破壞，在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，能夠了解降解速率和區(qū)分一級(jí)、二級(jí)降解產(chǎn)物。
1.4氧化破壞
氧化破壞試驗(yàn)相對(duì)較復(fù)雜，過(guò)氧化氫應(yīng)用較廣泛，因?yàn)槟軌蛴盟鼇?lái)模擬輔料中可能含有的過(guò)氧化物，其他氧化劑，如金屬離子，氧氣，以及自由基引發(fā)劑（例如，偶氮二異丁腈，AIBN）也可以應(yīng)用。
氧化劑種類和濃度的選擇取決于藥物本身的性質(zhì)。原料藥在溶液狀態(tài)下，制劑在溶液或固體狀態(tài)下進(jìn)行氧化破壞。
據(jù)報(bào)道,樣品放置于室溫,在中性條件下經(jīng)濃度為0.1%到3%的過(guò)氧化氫破壞7天,最多能產(chǎn)生20%的降解產(chǎn)物。
在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定,以選擇所需的降解水平,不同的降解條件會(huì)產(chǎn)生相同或不同的降解產(chǎn)物,降解的類型和程度取決于樣品的官能團(tuán)和降解條件。
2、分析方法 2.1試驗(yàn)方法??
首選檢測(cè)方法是反相高效液相色譜法，原因如下：與水和有機(jī)溶劑具體良好的相容性，準(zhǔn)確度好，靈敏度高，能夠檢測(cè)極性化合物。通過(guò)選擇合適的色譜柱、柱溫，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，從而達(dá)到各峰的分離。
低保留，極性較大的雜質(zhì)會(huì)在溶劑峰前出峰。梯度洗脫作為分析方法的一部分，流動(dòng)相中有機(jī)相比例由低到高過(guò)度，能夠檢測(cè)出低保留極性化合物和高度保留的非極性化合物。
也可以用梯度方法對(duì)破壞樣品進(jìn)行檢測(cè),來(lái)評(píng)估目前的洗脫方法是否能夠?qū)悠愤M(jìn)行有效的檢測(cè),選擇的樣品溶液和流動(dòng)相應(yīng)能充分反映和檢測(cè)出藥物本身、潛在雜質(zhì)和降解產(chǎn)物。
破壞樣品的制備方法應(yīng)盡可能地模擬分析過(guò)程中所用的樣品制備方法。對(duì)酸堿破壞樣品溶液進(jìn)行酸堿中和稀釋是必要的。破壞樣品的圖譜應(yīng)與空白溶液和未破壞樣品的圖譜進(jìn)行對(duì)比，從而確定各降解產(chǎn)物的降解途徑。
計(jì)算雜質(zhì)含量時(shí),應(yīng)扣除空白峰,空白,未破壞樣品和破壞樣品的圖譜均應(yīng)顯示所有的已知和未知雜質(zhì)的含量。另外,手性化合物應(yīng)該用手性分析手段來(lái)確定手性化合物的純度和穩(wěn)定性。
分析方法應(yīng)有足夠的靈敏度以檢測(cè)出較低水平的雜質(zhì)，（例如，應(yīng)檢測(cè)出0.05%濃度的雜質(zhì)或者更低濃度的雜質(zhì)），并且峰響應(yīng)值應(yīng)在線性范圍內(nèi)的峰響應(yīng)值以下。
分析方法應(yīng)能檢測(cè)到穩(wěn)定性研究過(guò)程中產(chǎn)生的所有雜質(zhì)(濃度為報(bào)告限度濃度或更低),依據(jù)ICH的要求和穩(wěn)定性研究結(jié)果，來(lái)決定降解產(chǎn)物是否應(yīng)該被鑒定和界定。
常規(guī)檢測(cè)方法(例如柱色譜法)或聯(lián)用技術(shù)(例如,LC–MS,LC–NMR)均可應(yīng)用于降解產(chǎn)物的鑒別和界定。通過(guò)使用這些技術(shù)可以更深入的了解雜質(zhì)結(jié)構(gòu),以及了解各雜質(zhì)是否存在基因毒性警示結(jié)構(gòu),并對(duì)這些雜質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格的控制。
還應(yīng)注意的是，對(duì)在穩(wěn)定性研究過(guò)程中產(chǎn)生的超過(guò)界定閾值限度的雜質(zhì)應(yīng)進(jìn)行界定。?
可以用不同的檢測(cè)方法對(duì)各破壞樣品進(jìn)行檢測(cè)(例如,紫外和質(zhì)譜),所用的檢測(cè)器應(yīng)具有三維數(shù)據(jù)分析的能力,例如,二極管陣列檢測(cè)器或質(zhì)譜分析能夠檢測(cè)到光譜的非均勻性。
當(dāng)主峰和雜質(zhì)峰紫外吸收?qǐng)D譜相似或者系統(tǒng)噪音水平過(guò)高從而掩蓋了雜質(zhì)或降解產(chǎn)物時(shí),二極管陣列檢測(cè)器可進(jìn)行多波長(zhǎng)檢測(cè)。
具有相同分子量和官能團(tuán)的化合物(例如非對(duì)映異構(gòu)體)會(huì)呈現(xiàn)出相似的紫外吸收?qǐng)D譜。這種情況下,需要改變色譜參數(shù)以實(shí)現(xiàn)色譜峰的分離。應(yīng)選定最佳波長(zhǎng)來(lái)檢測(cè)和定量潛在雜質(zhì)和降解雜質(zhì)。
如果被分析物、雜質(zhì)和降解產(chǎn)物紫外吸收沒(méi)有重疊，則應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行多波長(zhǎng)檢測(cè)。在方法開(kāi)發(fā)時(shí)，應(yīng)對(duì)匯總不同檢測(cè)波長(zhǎng)下雜質(zhì)的信息以發(fā)現(xiàn)峰值分布的異同。
2.2峰純度檢測(cè)
峰純度是一種方法開(kāi)發(fā)的輔助工具，當(dāng)不同化合物共同洗脫時(shí)，依據(jù)化合物的光譜特性來(lái)反映峰純度指標(biāo)。??
未破壞樣品和破壞樣品的峰純度或峰均勻性是根據(jù)二極管陣列檢測(cè)器的光譜信息確立的。
用于確定峰光譜純度的儀器軟件，相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照生產(chǎn)廠商的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置，并確定峰純度檢測(cè)時(shí)對(duì)色譜峰峰高的要求。
因?yàn)槲舛戎颠^(guò)大，紫外檢測(cè)呈非線性，應(yīng)同時(shí)設(shè)置儀器閾值，以確保共洗脫峰均能被檢出，并選擇參比光譜的最佳位置。
在梯度洗脫過(guò)程中，應(yīng)驗(yàn)證軟件自動(dòng)校正不斷變化的溶劑峰的能力。峰純度檢測(cè)不是確定檢測(cè)峰是否為純峰的絕對(duì)證明，當(dāng)共洗脫峰光譜相似、樣品濃度低于檢測(cè)限濃度、檢測(cè)峰沒(méi)有發(fā)色團(tuán)，或者樣品沒(méi)有溶解的情況下，峰純度檢測(cè)具有一定的局限性。
2.3質(zhì)量守衡
盡管不是在所有的情況下，破壞樣品均能達(dá)到質(zhì)量平衡,但這種方法能使穩(wěn)定性指示方法更加充分。
此法可以通過(guò)樣品測(cè)量值、所有雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的測(cè)量值之和與未破壞樣品初始值接近100%的程度來(lái)確定，在計(jì)算時(shí)適當(dāng)考慮產(chǎn)生的分析誤差。
盡量使所有的破壞樣品均達(dá)到質(zhì)量守衡。若樣品質(zhì)量不守衡，則應(yīng)進(jìn)行深入研究，并對(duì)這種情況給出說(shuō)明。由于被分析物和雜質(zhì)紫外吸收情況有顯著差異，應(yīng)用外標(biāo)法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。
揮發(fā)性雜質(zhì)的潛在損失、非紫外吸收化合物的形成，不保留雜質(zhì)，強(qiáng)保留雜質(zhì)等情況都應(yīng)被考慮在內(nèi)。
交替檢測(cè)技術(shù)，例如示差折光檢測(cè)器與液質(zhì)聯(lián)用可以用來(lái)檢測(cè)非紫外吸收的降解產(chǎn)物。
3、研究終點(diǎn)??
確保樣品在各降解條件下進(jìn)行充分的暴露后即可終止強(qiáng)制降解試驗(yàn)，藥物分子典型活化能從12 kcal/mol變換到24 kcal/mol。一種化合物不一定在每種降解條件下均產(chǎn)生降解，暴露極值的一般準(zhǔn)則可參考相關(guān)文獻(xiàn)。
一些穩(wěn)定藥物在任意降解條件下均不會(huì)產(chǎn)生降解，可以通過(guò)在藥物中加入已知雜質(zhì)來(lái)建立分析方法，同時(shí)應(yīng)保證各峰能夠達(dá)到基線分離。
另，在使用藥典和USP <621>中概述的限制使用的方法，降解試驗(yàn)是沒(méi)有必要研究的。
因?yàn)橥凰幬锏牟煌涂赡芫哂胁煌姆€(wěn)定性特征，當(dāng)一個(gè)仿制藥產(chǎn)品晶型不同于RLD產(chǎn)品晶型時(shí)，原料藥應(yīng)進(jìn)行降解試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)多晶性藥物的理化變化。?
四、相關(guān)說(shuō)明
在QbD理念中,研究關(guān)鍵質(zhì)量屬性滿足預(yù)定目標(biāo)的產(chǎn)品,必須運(yùn)用強(qiáng)制降解試驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)信息。
在QbD理念中，一個(gè)精心設(shè)計(jì)的強(qiáng)制降解試驗(yàn)研究對(duì)于分析方法的開(kāi)發(fā)是不可或缺的，它有助于建立一個(gè)穩(wěn)定的特異性指示方法和預(yù)測(cè)在穩(wěn)定性研究中可能形成的潛在降解產(chǎn)物。
將所有潛在雜質(zhì)混合進(jìn)行分析方法的建立，并且通過(guò)建立各峰峰純度的理念來(lái)幫助避免不必要的方法再開(kāi)發(fā)和再驗(yàn)證。
藥物在各降解條件下的化學(xué)變化，為制劑處方篩選提供有用的信息。輔料相容性試驗(yàn)的目的是了解藥物研發(fā)過(guò)程中，處方中各成分的相互作用，它是藥物研發(fā)過(guò)程中不可或缺的一部分。
分別對(duì)原料藥、制劑與參比制劑進(jìn)行強(qiáng)制降解試驗(yàn)和雜質(zhì)分布對(duì)比，藥物與輔料相互作用或者復(fù)方中藥物和藥物的相互作用而產(chǎn)生的降解雜質(zhì)是可以考察的。
從中獲得的藥物相關(guān)峰與藥物非相關(guān)峰的信息則可應(yīng)用于更穩(wěn)定的制劑處方的選擇和研究。
例如,如果一種藥物對(duì)氧敏感,需考慮在處方中加入抗氧劑;如果藥物本身對(duì)酸不穩(wěn)定,或者在酸性介質(zhì)中會(huì)轉(zhuǎn)換成其他物質(zhì)，那么將這種藥物做成緩釋制劑可能是必要的。
酸堿水解破壞試驗(yàn)可以為藥品制成液體制劑或混懸溶液制劑提供參考依據(jù)。?
在強(qiáng)制降解試驗(yàn)研究中獲得的信息可以促進(jìn)生產(chǎn)工藝過(guò)程的改進(jìn)，如果光穩(wěn)定性試驗(yàn)研究顯示藥物對(duì)光敏感，那么在藥品生產(chǎn)過(guò)程中就應(yīng)注意這點(diǎn)。
原料藥和制劑熱破壞性試驗(yàn)可以為工藝開(kāi)發(fā)提供有用的信息（例如，濕法制粒還是干法制粒，以及溫度的選擇）。
此外，提高降解產(chǎn)物和降解機(jī)制的科學(xué)認(rèn)知可能有助于確定導(dǎo)致穩(wěn)定性試驗(yàn)失敗的因素,如環(huán)境溫度，濕度和光。選擇合適的包裝材料可以避免這些因素的影響。
總之，降解試驗(yàn)的合理設(shè)計(jì)與制藥行業(yè)中正在推廣的QbD理念是相吻合的。在藥物開(kāi)發(fā)研究前，一個(gè)精心設(shè)計(jì)的降解試驗(yàn)研究可為產(chǎn)品處方組成的選擇提供依據(jù)。
對(duì)藥品降解途徑與降解機(jī)制的認(rèn)知，是QbD理念中分析方法開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)，同時(shí)也對(duì)制定產(chǎn)品在貨架期的可接受標(biāo)準(zhǔn)至關(guān)重要。
強(qiáng)制降解試驗(yàn)可提供藥物的物理、化學(xué)穩(wěn)定性方面的信息，為包材、存儲(chǔ)條件的選擇提供依據(jù)。
仿制藥產(chǎn)品在配方組成、生產(chǎn)工藝、工藝參數(shù)和包裝材料方面與原研參比制劑存在差異,因此進(jìn)行強(qiáng)制降解試驗(yàn)是非常必要的。
